Анализ кала на хеликобактер пилори методом пцр: достоверность, норма, расшифровка

Анализ кала на хеликобактер пилори – это достоверное доказательство наличия в организме человека бактерии, вызывающей язвенную и множество других болезней пищеварительного тракта человека. Такой анализ является прямым доказательством, если обнаруживается либо сам хеликобактер, либо его ДНК. Достоверность анализа самая высокая изо всех известных.

Как правильно сдавать анализ?

От правильности подготовки и сбора материала зависит результат. Присутствия человека не требуется, достаточно вовремя доставить правильно собранный материал.

Подготовка к сдаче анализа

При подготовке нужно неукоснительно соблюдать такие правила:

• сдавать кал на анализ не раньше, чем через 1 месяц после последнего приема антибиотиков;
• в течение 3-х суток, предшествовавших сбору материала, нельзя употреблять красящие продукты (чай, кофе, красные и оранжевые фрукты и овощи, куркуму, карри, соевый соус),
• исключить грубую клетчатку – капусту, редьку, редис, перловую кашу, отруби, свеклу;
• нельзя принимать лекарства, усиливающие моторную функцию кишечника – Лактулозу, Мотилиум и подобные;
• отказаться от алкоголя;
• не принимать антацидных средств (Альмагель и подобные);
• собирать материал в течение первой недели после возникновения симптомов болезни (далее концентрация хеликобактера в кале уменьшается).

Для подготовки достаточно 3-х дней. В это время желательно отказаться от всех лекарств (если сделать этого нельзя, сообщить врачу названия и дозировку).

Нужно сократить употребление рыбы и мяса, готовить их на пару или варить.

Лучшая еда на это время – каши и кисломолочные продукты, овощные и фруктовые пюре, слабые супы, нейтральные натуральные соки (яблочный, белый виноградный), компоты, морсы, слабый чай, отвар шиповника.

Подготовка тары

В самом крайнем случае можно воспользоваться стеклянной банкой с хорошо подогнанной крышкой (из-под детского питания). Банку нужно хорошо вымыть, а затем прокипятить вместе с крышкой и ложкой или другим предметом, которым будет набираться кал. Если на посуде останутся бактерии, анализ окажется неверным.

Сбор материала

Собирать материал из унитаза или памперса нельзя. Унитаз нужно накрыть чистым полиэтиленовым пакетом, а вместо памперса (ребенку или лежачему больному) подстелить клеенку. Допускается забор материала из чистого горшка.

Контейнер заполняется не более чем на одну треть, плотно закрыть крышкой. К посуде прикрепить направление или написать на этикетке (разборчиво) фамилию и имя пациента, год рождения.

Как и сколько можно хранить материал?

Контейнер с материалом доставляется в лабораторию как можно раньше, оптимально в день забора. Если возможности срочной доставки нет, допускается хранение в холодильнике не более 2-х суток при температуре не выше +4 °С. При необходимости более длительного хранения материал однократно замораживают при температуре -20 °С.

Методики анализа и расшифровки показателей

Биологический материал можно исследовать разными способами.

Метод	Сроки проведения	Расшифровка результатов
ПЦР	1 рабочий день	отрицательно; положительно
Бакпосев	от 6 до 12 дней	не обнаружено 1 степень – нет роста на твердой среде; 2 степень – 10 колоний; 3 степень – до 100 колоний в твердой среде; 4 степень – выше 100 колоний
ИФА	Материал – венозная кровь, в течение рабочего дня, срочно за 2 часа	положительно – 1,1 Ед/мл, высокий риск; сомнительно – от 0,9 до 1,1 Ед/мл , рекомендуется повтор через 2 недели; отрицательно – ниже 0,9 Ед/мл, риск низкий

Другие способы выявления хеликобактера

При обследовании используют обычно несколько методов, чтобы окончательно убедиться в наличии или отсутствии хеликобактера:

• Дыхательный тест. Выполняется выдох в подготовленный мешочек, затем дают выпить медицинский радиоактивный углерод, через 10 или 30 минут нужно выдохнуть в другой мешочек. Обнаруживает присутствие хеликобактера в самых малых количествах.
• Быстрый уреазный тест желудочного биоптата. Основан на том, что бактерия выделяет уреазу, расщепляющую мочевину на аммиак и СО2. Во время эндоскопического осмотра берут 4 биоптата с разных участков желудка, помещают в ячейки CLO-теста. Чем больше хеликобактера, тем быстрее меняется цвет ячейки.
• Антиген хеликобактера в кале. Частички бактериальной стенки вступают в реакцию с моноклональным антителом, от этого изменяется цвет индикатора. Выпускаются тест-кассеты для домашнего использования. По инструкции кал смешивают с растворителем (прилагается пробирка с ним), несколько капель наносят в окно кассеты. Две полоски – положительно, одна – отрицательно. Дополнительно по маркировке можно узнать, действителен ли тест.
• Гистологическое исследование биоптата. Полученный при ФГДС биоптат (5 образцов) окрашивают по различным методикам, чувствительность анализа доходит до 99%.
• Вестерн-блот. Проводят у тех, у кого обнаружены антитела к хеликобактеру методом ИФА (описано выше). Определяется количество антител каждого класса (A,G,M).

Набор диагностических тестов зависит от оснащенности лечебного учреждения. «Золотым стандартом» считается гистологическое исследование. Однако положительный результат хотя бы двух разных тестов считается достаточным для того, чтобы подтвердить присутствие бактерии.

Что делать при положительном анализе?

Как можно скорее посетить гастроэнтеролога, чтобы выяснить, нужно ли проводить эрадикацию (удаление из организма) бактерии. Это неоднозначный процесс, есть противопоказания, консультация врача необходима.

После оценки уровня здоровья врач выбирает одну из схем, утвержденных международным сообществом. В зависимости от особенностей патологического процесса используются лекарственные сочетания препаратов таких групп:

• ингибиторы протонной помпы – Омепразол, Рабепразол и другие;
• кларитромицин – антибиотик группы макролидов;
• амоксициллин – полусинтетический пенициллин;
• метронидазол – противопротозойный препарат с антибактериальной активностью;
• препараты висмута – противоязвенные, оказывающие защитное действие на слизистую желудка;
• тетрациклин – антибиотик широкого спектра действия.

Рекомендуем почитать:

Анализ кала на УПФ: подготовка, сдача и расшифровка

В процессе лечения тесты на хеликобактер могут повторяться, чтобы отслеживать эффективность лечения.

После обнаружения и удаления бактерии язвы и другие поражения слизистой заживают полностью, а также прекращаются все вторичные нарушения – восстанавливается микрофлора, синтез витаминов и гормонов, пищеварение, снижается риск развития рака желудка.

Источник: https://ProKishechnik.info/obsledovaniya/analiz-kala-na-helikobakter-pilori.html

Анализ кала на хеликобактер

Положительный результат анализа кала на хеликобактер служит достоверным доказательством заражения человека. Исследование относится к прямым видам, когда выявляется конкретный возбудитель или его ДНК, а не последствия его воздействия или продукты распада (как при проведении иммунологических анализов крови).

Кроме того, достоинством способа является его неинвазивность — отсутствие необходимости применять для забора материала более или менее травматичные процедуры (прокола вены для взятия крови, введения дуоденального зонда).

Проведение анализа кала не связано с присутствием пациента, достаточно своевременной доставки в лабораторию испражнений. Это особенно важно для обследования детей.

Лечащий врач определяет необходимость и выбор способа исследования. Немалое значение имеет доступность анализа для конкретного пациента из-за цены. Большая часть выполняется только в частных клиниках и лабораториях, поскольку требует дорогостоящего оборудования.

Цель исследования — выявление причинной связи заболевания с хеликобактер и назначение целевого курса лечения для избавления от возбудителя.

Что представляет собой хеликобактерия?

Название Helicobacter pylori переводится как «спиралевидная привратниковая». Оно привязано к характерной форме бактерии, локализации в области привратника (приграничная зона желудка с двенадцатиперстной кишкой). Микроорганизм имеет жгутики, помогающие ему перемещаться даже в густой слизи.

Хеликобактерия способна выдерживать кислую среду желудочного сока. Для жизнеобеспечения использует энергию молекул водорода, которую вырабатывают кишечные бактерии.

Бактерия синтезирует около 20 ферментов

Наиболее известные ферменты хеликобактер:

• оксидаза,
• уреаза,
• каталаза.

К особенностям микроорганизма относятся:

• сложность выделения культуральным способом, поскольку хеликобактерия не растет на обычных питательных средах;
• длительный период отсутствия симптоматики, указывающей на заражение;
• возможность в «опасной» ситуации трансформироваться в шаровидную форму и покрываться защитной пленкой.

Агрессивность бактерии является основной причиной атрофической формы хронического гастрита с дальнейшим переходом в язвенную болезнь и раковую опухоль.

В кале спиралевидную форму обнаружить невозможно, поскольку кишечная среда неблагоприятна для существования хеликобактерии. Здесь не имеется нужной кислотности, мало кислорода, действуют сильные разрушающие ферменты желчи, поджелудочной железы. Поэтому в каловых массах находится кокковая форма бактерии.

Кому рекомендуется проверить анализ кала на хеликобактерию?

Симптомы поражения желудка, вызванные хеликобактерией, могут быть минимальными или соответствовать клинике обострения заболевания. У пациента наблюдаются:

• вздутие живота;
• отрыжка;
• изжога;
• болевой синдром, особенно при обострениях весной и осенью;
• запоры или поносы;
• чувство тяжести в эпигастрии;
• снижение аппетита;
• резкое падение веса.

Показаниями к исследованию могут быть:

• необходимость проверки перед длительным курсом терапии нестероидными противовоспалительными лекарствами, ингибиторами протонной помпы, поскольку они снижают выработку соляной кислоты в желудке;
• признаки железодефицитной анемии;
• неясная тромбоцитопения;
• возможность заражения членов семьи;
• контроль проведенного курса антибиотикотерапии;
• выяснение связи с генетической предрасположенностью.

У ребенка о признаках заражения говорят жалобы на тошноту, неясные боли в животе, плохой аппетит и отказ от еды, частое обильное срыгивание, а также вздутие и урчание живота.

Способ бактериологического посева

Выделение культуры возбудителя — микробиологический вид исследования.

Классика способа требует посева материала на питательную среду, подсчета выросших колоний, исследования микроорганизма из колонии под микроскопом.

Также необходимо проведения биохимических проб для изучения его свойств и дополнительного посева на среду с антибиотиками для выявления чувствительности к разным препаратам.

Среда для посева довольно дорогая, готовится специально

Анализ кала на хеликобактер пилори с помощью культурального способа провести сложно:

• посев должен проходить без доступа кислорода;
• можно выделить только спиралевидные формы, которые редко попадают в кал, а не кокковые;
• результаты реакции на чувствительность к антибиотикам in vitro (инвитро означает «на стекле, в пробирке») на практике оказываются обманчивыми и в некоторых случаях не совпадают с фактическим применением у пациента (in vivo), обнаруженный оптимальный антибиотик оказывается недостаточно эффективным;
• анализ требует длительного срока (7–10 дней) для полного проведения.

По этим причинам использование метода для диагностики ограничено.

Суть иммунологического анализа — выявление комплексов антитело+антиген, в котором чужеродным агентом является хеликобактерия. Более привычно использование по исследованию крови. Но фактически косвенные признаки наличия антигена можно подтвердить по наличию в стуле, слюне, моче, у беременных в околоплодной жидкости.

В методиках используются готовые «помеченные» антитела. При обработке ими кала пациента, содержащего антигены (остатки хеликобактерии) возникает реакция соединения со стандартными антителами. Длительность исследования — сутки. Анализ кала на антиген хеликобактер назначается, если у пациента имеются любые симптомы нарушения пищеварения.

Наиболее распространенный вариант — первичный скрининг населения (обследование всех обратившихся или определенных групп), не имеющего специфических жалоб. В России не применяется из-за отсутствия достаточного количества иммунологических тестов в лабораториях поликлиник.

Метод ПЦР

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) относится к молекулярно-генетической диагностике. С ее помощью выявляется не бактерия, а ее специфическая ДНК. Даже при малом количестве, в случае выздоровления или бессимптомного носительства метод позволяет с достаточной точностью связать изменения в организме с действием хеликобактер.

Длительность анализа экспресс-методом 5–6 часов, обычным — 2–3 суток

Методика рассчитана на искусственный синтез отдельных частей ДНК, удвоение и построение цепочки из 30 циклов. Процесс не происходит в случае отсутствия малейших остатков биоматериала. Для реакции необходим прибор ампликатор. Полимераза — фермент, ускоряющий процесс.

ПЦР кала назначают для подтверждения роли хеликобактерии в патологии и определения целесообразности специфической терапии:

• при эрозиях и язвах в желудке, пищеводе и двенадцатиперстной кишке;
• желудочно-пищеводном рефлюксе (заброс содержимого в обратном направлении);
• атрофическом поражении слизистой желудка;
• полипах;
• опухолях желудка;
• выявлении наследственной предрасположенности в случае наличия у родственников злокачественных опухолей органов пищеварения;
• контроле за результатами терапии антибиотиками.

Преимуществами ПЦР кала можно считать:

• высокую чувствительность и специфичность (соответственно определяются в 94% и 100%), реакция бывает положительной даже при наличии 10 бактерий;
• простоту проведения;
• безопасность для пациента, отсутствие травматичности при заборе материала;
• возможность определения ДНК как в спиралевидных, так и в кокковых формах хеликобактерии;
• выделение и изучение различных генетических модификаций, штаммов.

Результат редко выдает ложноположительную информацию при отсутствии инфицированности человека.

Недостатки исследования:

• не представляется возможность определения оптимального антибиотика по чувствительности;
• нет различий между протекающим острым заболеванием и остаточными явлениями после обострения, ДНК бактерий остаются в кале почти месяц после клинического выздоровления;
• чувствительность все-таки ниже, чем при исследовании биоптата из стенки желудка;
• сравнительно высокая стоимость;
• необходимость подготовки персонала и приобретения оборудования;
• положительная реакция в случаях загрязнения персоналом материала из чужого образца (контаминация извне).

ПЦР-лаборатория имеет усовершенствованную технику, позволяющую получить достоверные результаты диагностики

Как оценить результаты анализов?

Расшифровка результатов исследования — дело врача специалиста. Не стоит прибегать к самостоятельной трактовке или пользоваться услугами знакомых. Оценка проводится по комплексу признаков. При ПЦР выдается результат:

• отрицательный, если не выделился генотип хеликобактерии, обнаруживается в норме;
• положительный, если у пациента разгар заболевания или заражение было в анамнезе.

При бактериологическом исследовании:

• выявлено нулевое количество бактерий или хеликобактер отсутствует;
• если количество микроорганизмов больше нуля — подтверждается хелибактериоз;
• знак S означает чувствительность к заявленному антибиотику;
• R — указывает на устойчивость (резистентность) к препарату;
• I — чувствительность умеренная.

Бакпосев кала позволяет дать не только качественную, но и количественную характеристику хеликобактериального заражения. Для этого учитываются степени роста бактерии:

• 1 степень — наблюдается слабый рост на жидкой среде, на твердых образцах — роста нет;
• 2 степень — вырастает до 10 колоний;
• 3 степень — число выросших колоний достигает 100;
• 4 степень — распространенность и активность возбудителя очень активны, вырастает более 100 колоний.

Последние две степени считаются наиболее достоверными источниками информации об участии хеликобактер в патологических изменениях желудка.

Тестирование проводят методом иммуноферментного анализа со стандартными сыворотками

Иммунологические тесты показывают отрицательный результат, если антиген возбудителя не определяется, положительный — при наличии хеликобактериоза. Достоверность иммунологического и культурального методов значительно уступает ПЦР, для их проведения необходима массивная распространенность возбудителя в фекалиях.

Как подготовиться к сдаче анализа?

Где можно сдать анализ, укажет врач. Он же должен ознакомить пациента с правилами забора материала и подготовки. Некоторые частные клиники выдают посетителям напечатанную инструкцию «Как сдавать анализы». От соблюдения указанных условий зависит результативность исследования.

Общими правилами забора фекалий на выявления хеликобактер являются:

• прекращение приема антибактериальных средств за трое суток до анализа;
• контрольную сдачу анализа кала проводят через месяц после окончания курса лечения;
• некоторые анализы требуют за три дня до исследования перейти на диету без продуктов с пищевой клетчаткой, исключить соленья, алкогольные напитки;
• запрет на использование слабительных препаратов, ректальных свечей, если лечение требует ежедневного приема, нужно предупредить врача;
• собирать кал нужно в чистую лабораторную посуду (выдается в клинике или покупается в аптеке), желательно отбор проб производить из трех точек;
• непригодным считается кал с примесями слизи, гноя, крови, мочи;
• доставка материала в лабораторию должна быть обеспечена в первые 2 часа, при необходимости разрешается хранить в холодильнике не более суток при температуре от 2 до 8 градусов.

Специальный набор для забора кала на анализ можно приобрести в аптеке

Дополнительные исследования

Пациент при диагностике не должен настаивать на изолированном исследовании кала. Используя дополнительные виды, врач повышает достоверность информации о заражении хеликобактерией.

Большой популярностью пользуются уреазные дыхательные тесты.

Проведение иммунологических исследований сыворотки крови может быть порекомендовано в случае необходимости дифференциальной диагностики формы поражения.

Неопровержимым видом обследования является цитологическое исследование образца слизистой желудка, полученного при биопсии во время фиброгастроскопического исследования. При высокой разрешающей возможности микроскопа лаборант видит окрашенную хеликобактерию.

Фиброгастроскопическая картина самой слизистой с характерными эрозиями, атрофией, изъязвлением указывает на косвенные признаки присутствия возбудителя в желудке. Рентгенологическая диагностика также позволяет по нарушениям в направлении складок, контуров желудка судить об органической патологии, вызванной хеликобактерией.

По итогам анализов врач может ввести пациента в группу риска с повышенной вероятностью заболевания язвой желудка, злокачественными опухолями. Предварительное применение специфического лечения позволяет снизить степень риска. При выборе медицинского учреждения для выполнения исследований на платных условиях нужно посоветоваться по поводу репутации и ответственности его сотрудников.

Источник: https://vrbiz.ru/diagnostika/analiz-kala-helikobakter

Анализ кала на хеликобактер пилори — как сдать стул тест, его достоверность — БольВЖелудке

Современные диагностические методы позволяют узнать многое о состоянии здоровья человека по его биологическим жидкостям: крови, моче, фекалиям.

Исследуя кал, можно узнать, поселилась ли в организме бактерия Н.руlori, способная вызывать гастриты, язвы желудка и провоцировать онкопатологию.

Кал на наличие или отсутствие данного микроба можно изучать тремя способами: культуральным, иммунологическим, и наиболее достоверным и распространённым – методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР).

Определение хеликобактер культуральным методом

Сама бактерия крайне редко встречается в фекалиях в своей привычной S-образной форме целиком. Толстый кишечник и каловые массы не являются благоприятной средой для микроорганизма, поэтому, попадая в них, она может принимать круглую кокковую форму, изредка встречаясь в испражнениях именно в таком виде.

Культуральный метод подразумевает под собой посев части исследуемого материала на питательную среду, в которой бактерия будет хорошо себя чувствовать и начнёт размножаться.

Таким образом:

Происходит рост колоний, которые анализируются, окрашиваются специальными реактивами и исследуются под микроскопом. Данным способом в прямом смысле выращивают патогенные микробы с целью их дальнейшего изучения.

Культуральный способ весьма достоверен, но только в том случае, если во взятом биологическом материале обнаружена S-форма микроба. Метод имеет свои недостатки, и по этой причине не слишком распространён:

• Сроки исследования занимают от 6 до 12 дней
• Дорогостоящие среды для высевания хеликобактерий
• Специфические условия для сред, обеспечивающие рост колонии, которые сложно воспроизвести в лаборатории
• Редкая встречаемость S-образных форм бактерии в испражнениях, пригодных для роста в питательных условиях (кокковые формы не исследуют)

Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом

• Фекалии пациента могут быть подвергнуты иммунологическому исследованию, которое позволяет выявить уже не сам микроорганизм, а его части – антигены.
• Для этого:
• Используются специальные антитела, направленные на обнаружение чужеродного антигена – частей бактерии, продуктов её жизнедеятельности, генетического материала.
• Взаимодействуя с чужеродным агентом, антитела образуют специфический комплекс, который и определяется иммуно-ферментным анализом.
• Данный способ изучения кала редко применяется в России, не многие лаборатории оснащены необходимыми реактивами и необходимыми тестами.
• Но в перспективе возможно включение данного способа обнаружения хеликобактер в качестве скрининг-тестов: исследования широких групп населения на заражённость бактерией.

Анализ кала ПЦР на хеликобактер пилори

1. Это наиболее распространённый метод исследования фекалий на данную бактерию, обладающий высокой точностью.

2. Суть способа в следующем:
3. Из биологического материала пациента выделяется участок ДНК бактерии, который затем многократно искусственно дублируется на специальном аппарате, так происходит восстановление гететического кода Н.

   руlori

4. Когда геномный фрагмент микроба достигает достаточных размеров, его сравнивают с эталонным и делают вывод об исследуемом микроорганизме: хеликобактер ли это или другой патоген.

5. Положительный ПЦР анализ означает наличие в организме человека хеликобактерной инфекции: бактерия присутствует в желудке, ее фрагменты ДНК обнаружены в кале и совпали с эталонными.

Достоинства ПЦР-метода:

• Высокая точность: даже незначительного количества генетического материала достаточно для исследования с большим процентом достоверности, приближающимся к 99%.
• Быстрота исследования. 2 суток достаточно для анализа, но существуют экспресс-способы, позволяющие установить диагноз за несколько часов.
• Безболезненность. Способ атравматичен, неинвазивен. Позволяет обследовать маленьких детей, пожилых, ослабленных пациентов, которым противопоказана ФГДС с биопсией и другие эндоскопические манипуляции.
• Для точного результата не обязательно обнаружение ДНК-фрагментов именно S или спиралевидных форм, части кокковых микробов (наиболее встречающихся в испражнениях) тоже подходят для анализа.

У ПЦР-диагностики значительно больше плюсов, чем минусов. К недостаткам можно отнести:

• Относительно высокую стоимость анализа.
• Сохранение фрагментов ДНК микроба в фекалиях и после эрадикации. Даже если лечение успешно пройдено и бактерия отсутствует в организме, ещё спустя какое-то время фрагменты ДНК обнаруживаются в биологическом материале и стул тест на хеликобактер может дать положительный результат. Поэтому с целью контроля излеченности рекомендуется ПЦР-диагностика не ранее, чем через 1 месяц после окончания терапии.
• Специальная дорогостоящая высокотехнологичная аппаратура, для работы на которой необходим подготовленный и обученный персонал.

Анализ кала на антиген хеликобактер пилори инвитро

Все диагностические исследования, проводимые с фекалиями пациента, относятся к манипуляциям ин витро – «в пробирке», «в стекле», вне организма человека.

Они обладают достаточно высокой точностью и информативностью, если преследуют цель обнаружения микроба.

Но не все процессы, происходящие «ин виво» — внутри человеческого организма, можно с той же достоверностью воссоздать «ин витро». К примеру, определение чувствительности к антибиотикам, анализируемую культуральным методом.

При исследовании антибактериальной чувствительности колоний микробов на питательных культурах, было выявлено, что самые подходящие препараты для бактерий ин витро, «не работали», оказывались малоэффективными при лечении пациента.

Результаты исследований чувствительности бактерии к антибиотикам «в пробирке» не всегда точны.

Как сдать анализ кала на хеликобактер пилори

Информативность диагностического теста зависит не только от выбранного исследования, качества оборудования и квалификации персонала, а еще и от того, как пациент подготовился к анализу.

Кал для исследования необходимо правильно собрать:

• После дефекации часть фекальных масс необходимо поместить в стерильный контейнер для сбора биологического материала, который нужно заранее приобрести в аптеке или в лаборатории.
• Исключить попадание в биологический материал крови, мочи, слюны, гноя и других посторонних примесей, которые с большой вероятностью исказят результаты анализа.
• Контейнер с содержимым необходимо плотно закрыть и доставить в лабораторию не позднее 4-5 часов до исследования.

Кроме соблюдения технических моментов сбора материала для анализа, на протяжении нескольких дней до сдачи кала, нужно соблюдать следующие рекомендации:

• За неделю до сдачи перестать принимать антибиотики.
• За три дня не употреблять алкоголь, пищу, с большим содержанием клетчатки, а также способную приводить к окраске каловых масс: свеклу, напитки с красителями.
• Не применять ректально свечи либо мази, не пользоваться слабительными препаратами.

Соблюдение вышеописанных правил позволить врачу лабораторной диагностики максимально точно оценить состояние здоровья пациента и сделать правильные выводы при анализе.

Достоверность анализа кала на хеликобактер

ПЦР — диагностика фекалий наиболее достоверна из всех трех вышеописанных способов, она в какой-то степени уступает лишь биопсийному эндоскопическому исследованию.

ПЦР-анализ кала редко дает ложноположительные результаты, обладает высокой специфичностью, позволяет исследовать ДНК-материал часто встречаемых кокковых форм хеликобактерий в испражнениях.

Достоверность культурального и иммунологического метода ниже, чем ПЦР. Эти методы «грешат» появлением ложноположительных результатов, но в совокупности с другими способами выявления Helicobacter pylori, они являются прекрасным подспорьем для постановки диагноза.

Антиген H.pylori в фекалиях

В случае, если в кале обнаружен антиген хеликобактер пилори либо ДНК-фрагмент исследуемого микроорганизма, это означает, что:

• Человек инфицирован Н.руlori.
• Эрадикационная терапия недостаточно эффективна и микроб не исчез из слизистой оболочки ЖКТ.
• Прошло меньше месяца после терапии и в кале сохраняются антигены умертвлённых патогенов.

Чтобы исключить ложноположительный результат после прохождения схемы антихеликобактерной терапии (когда анализ положительный, а организм человека не содержит Н.рylori), следует не торопиться узнавать эффективность лечения, а выждать не менее одного месяца после его окончания.

Если лечение бактерии проведено успешно, спустя 1 месяц после эрадикации в кале не выявляются антигены и ДНК микроба. Результат обследования – отрицательный.

В случае выявления антигенов при первичном анализе, врач порекомендует пациенту пройти курс специальной терапии, направленной на уничтожение Н.руlori.

Источник: https://bolvzheludke.ru/poleznoe/analiz-kala-na-helikobakter/

Как сдавать анализ кала на хеликобактер пилори. Рекомендации доктора

Результат терапии напрямую зависит от правильно составленной схемы лечения. Для определения чувствительности микроорганизмов к определенным видам антибактериальных препаратов используются специальные анализы каловых масс. Каждая методика имеет свои достоинства и недостатки. Для получения точных результатов рекомендуется провести несколько тестов.

1. Кому рекомендуется проверить анализ кала на хеликобактерию?

Хеликобактер пилори длительное время присутствует в организме бессимптомно. Признаки нарушения функционального состояния желудочно-кишечного тракта проявляются только при активной жизнедеятельности бактерий. Одним из основных провоцирующих факторов является снижение иммунитета.

При наличии у пациента определенных заболеваний или отдельных симптомов процедура анализа на хеликобактериоз становится обязательной.

Показания к анализу:

• проведение антибактериальной терапии (для контроля результатов лечения);
• эрозии и язвы двенадцатиперстной кишки или желудка;
• симптомы нарушения функционального состояния пищеварительного тракта (регулярные запоры или диарея, метеоризм, болевые ощущения различной локализации);
• генетическая предрасположенность к заболеваниям, провоцируемым хеликобактер пилори (злокачественные опухоли органов пищеварения, хронические патологии пищеварительного тракта);
• прогрессирующая атрофия слизистых оболочек желудка;
• регулярные болевые ощущения в желудке после употребления пищи;
• железодефицитная анемия;
• резкое снижение массы тела в сочетании с другими симптомами отклонений в функциональном состоянии пищеварительного тракта;
• наличие крови в рвотных или каловых массах;
• выявленные новообразования и полипы в пищеварительной системе;
• язва пищевода или гастроэзофагеальный рефлюкс.

Рекомендуем посмотреть видео:

2. Как правильно сдавать анализ?

Проведение процедуры исследования каловых масс на наличие патогенных бактерий подразумевает соблюдение ярда правил.

Если подготовка к анализу или сбор биологического материала будут совершены неправильно, то результаты тестов могут показать ложный результат. Каловые массы имеют определенный срок хранения.

Если материал будет доставлен в лабораторию с нарушением сроков, то тестирование также может стать недостоверным.

Подготовка к сдаче анализа

Подготовительные меры для анализа кала на хеликобактер пилори включают в себя рекомендации по соблюдению определенного режима питания, а также корректировку медикаментозной терапии (при ее наличии). Если прием назначенных препаратов временно прекратить не получается, то данный нюанс обязательно сообщается врачу.

Вещества, содержащиеся в антибиотиках и других категориях медикаментов, могут стать причиной неправильной расшифровки данных исследования.

Рекомендации:

• за несколько дней до процедуры следует прекратить прием слабительных или антацидных средств;
• в течение месяца до проведения теста пациент не должен принимать антибактериальные препараты;
• нельзя в течение нескольких дней употреблять продукты с содержанием грубой клетчатки (свекла, капуста, редис, редька);
• в течение трех дней до процедуры из рациона исключаются крепкий чай, кофе, острые специи и приправы, овощи и фрукты красного или оранжевого цвета);
• блюда в течение трех дней перед анализом рекомендуется готовить только методами варки, тушения или паровой обработки;
• несколько дней нельзя употреблять алкогольные напитки.

Подготовка тары

Стерильную емкость для сбора биологического материала можно приобрести в аптеке. При покупке такой баночки исключается наличие загрязнений. В качестве альтернативы можно использовать другие варианты тар (например, емкости от детского питания). Важным нюансом является их стерильность. Емкости должны быть максимально очищены от любых видов загрязнений.

Сбор материала

Запрещено собирать каловые массы с памперса или из унитаза. Идеальным вариантом является забор биологического материала из горшка или с полиэтиленового пакета. Емкость для хранения кала должна быть заполнена на одну третью часть. К таре обязательно прикрепляется заполненное направление.

Как и сколько можно хранить материал?

Емкость с каловыми массами доставляется в лабораторию как можно быстрее. Если возможность быстро направить материал для анализа отсутствует, можно воспользоваться двумя вариантами хранения. В первом случае каловые массы однократно замораживаются. Во втором — хранятся не более двух суток при температуре не выше 4 градусов.

3. Тактика определения бактерии хеликобактер с помощью анализа кала

Назначением конкретного анализа на хеликобактериоз занимается врач. Специалист учитывает индивидуальную клиническую картину состояния здоровья пациента. Сдать анализы на хеликтобактериоз можно самостоятельно, если возникают подозрения на функциональное отклонение пищеварительного тракта.

Молекулярная диагностика

При молекулярном анализе выявляется специфическая ДНК бактерии. Код дублируется на специальном аппарате. При достижении бактерией нужного размера, ее сравнивают с этанолом. Если части ДНК совпадают с оригиналом, то результат теста положительный (хеликтобактериоз выявлен). Методика отличается высокой степенью информативности.

Культуральный анализ

Бактериальный посев (или культуральный анализ) относится к категории микробиологических методов исследований. В процессе поведения процедуры биологический материал помещается в среду, которая является максимально благоприятной для размножения патогенных микроорганизмов. Через неделю каловые массы изучаются с помощью микроскопа.

Для идентификации хеликобактер пилори учитываются окраска бактерий и их способности вступать в определенные реакции.

Особенности методики:

• процедура позволяет выявить патологический антиген;
• в процессе изучения биологического материала проводится тест на чувствительность к антибактериальным препаратам;
• результаты исследования позволяют подобрать максимально эффективную схему терапии.

Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом

Главной целью проведения иммунологических тестов при выявлении хеликобактер пилори является определение комплексов антиген + антитело. Для исследования используются помеченные антитела.

Вступая в реакцию с калом, такие вещества подвергаются определенным изменениям.

Антитела способны определить наличие в каловых массах не только патогенные бактерии, но и их части, а также продукты жизнедеятельности.

Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики

ПЦР-диагностика имеет ряд достоинств и недостатков. Некоторые виды патогенных бактерий можно выявить только с помощью данной методики (например, цитотоксичные типы микроорганизмов). Сбор материала для анализа не подразумевает причинение боли или дискомфорта пациенту. Процедура показывает максимально достоверные результаты.

Преимущества методики:

• процедура позволяет выявить различные штаммы патогенных бактерий;
• метод отличается высокой степенью чувствительности;
• анализ безопасен для пациента (для сбора материала не применяются медицинские инструменты);
• неинвазивность и простота процесса забора биологического материала;
• высокая степень специфичности теста;
• метод позволяет определить не только спиралевидные, но и кокковые типы бактерий.

Высокая степень чувствительности теста является его одновременным достоинством и недостатком. Анализ с точностью определяет наличие бактерий, но при загрязнениях биологического материала или тары, результаты процедуры могут быть ложноположительными.

Для исключения ложных показателей следует соблюдать все правила сбора каловых масс для проведения их исследования.

Другие недостатки:

• относительно высокая цена процедуры;
• отсутствие возможности определить чувствительность бактерии к антибактериальным препаратам;
• более низкий показатель чувствительности в сравнении с процедурой исследования биоптата слизистой оболочки желудка.

Анализ кала на антиген хеликобактер пилори инвитро

Процедуры исследования каловых масс осуществляются вне организма пациента («ин витро» — «в стекле», «в пробирке»). Для обнаружения микроба такие методы являются максимально точными и эффективными. Однако процедуры имеют некоторые недостатки. Некоторые процессы, происходящие в человеческом организме нельзя воссоздать искусственным способом.

Анализы могут показать уровень чувствительности бактерий к определенным антибиотикам, но стопроцентной информативности такие тесты не дают.

4. Расшифровка результатов

Процедура	Уровень достоверности результатов	Расшифровка результатов исследования
ПЦР	Высокая	Положительный — выявлен хеликтобактериоз; отрицательный — не выявлено ни одного типа хеликобактер пилори
Бактериологический анализ на чувствительность к антибактериальным препаратам	Низкая — на выявление антигенаВысокая — на определение чувствительности	Количество бактерий 0 — результат отрицательный, бактерии не выявлены; показатели больше 0 — определен хеликтобактериоз; R — устойчивость к определенному антибиотику; I — умеренная степень чувствительности к антибиотику; S — высокая степень чувствительности к антибиотику
Иммунологические методы	Низкая	Положительный — выявлен хеликтобактериоз; отрицательный — патогенная бактерия не выявлена

5. Итоги

• существует несколько способов определения хеликобактерии в каловых массах лабораторным методом;
• каждый вариант анализов имеет свои достоинства и недостатки;
• для получения максимально точных результатов рекомендуется сдать несколько анализов разных типов;
• каловые массы для анализа собираются с учетом ряда правил;
• за несколько дней до процедуры из рациона исключается грубая клетчатка, жареные, жирные блюда, острые специи и приправы, алкоголь и любые плоды оранжевого или красного цвета;
• емкость для кала должна быть стерильной (оптимальный вариант — аптечные тары).

Видео на тему: Чем опасна бактерия Хеликобактер Пилори?

6. Список литературы

1. Описательная эпидемиология H. pylori-инфекции у пациентов с диспепсией НВ Бакулина, В Симаненков, ИГ Бакулин — 2017
2. Воспалительные заболевания кишечника. Клиническое руководство Под ред. Д.Дж. Штайн, Р. Шейкер; Пер. с англ.; Под ред. И.Л. Халифа 2019
3. Доктор. Гастроэнтерология и гепатология Под ред. Г.Л. Вышковского 2017

Источник: https://gastrocure.net/bolezni/khelikobakter/analiz-kala-na-khelikobakter.html

Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

[09-053] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

1025 руб.

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

• Синонимы русские
• Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].
• Синонимы английские

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

1. Метод исследования
2. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
3. Какой биоматериал можно использовать для исследования?
4. Биоптат, кал.
5. Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки.

Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H.

 pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается.

Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала.

Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции.

РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95  %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori.

Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H.

 pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori.

Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности.

Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов.

Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

• атрофического или антрального гастрита;
• язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
• При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.

• Что означают результаты?
• Референсные значения: отрицательно.
• Положительный результат:

• текущая H. pylori-инфекция;
• H. pylori-инфекция в анамнезе.

Отрицательный результат:

• отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

• Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
• Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.



Важные замечания

• Исследование не позволяет дифференцировать текущую H. pylori-инфекцию и инфекцию в анамнезе.

1. Также рекомендуется
2. Кто назначает исследование?
3. Гастроэнтеролог, педиатр, врач общей практики.
4. Литература

• Tahereh Falsafi, Raha Favaedi, Fatemeh Mahjoub, and Mehri Najafi. Application of Stool-PCR test for diagnosis of Helicobacter pylori infection in children.
• Kabir S. Detection of Helicobacter pylori DNA in feces and saliva by polymerase chain reaction: a review. Helicobacter. 2004 Apr;9(2):115-23. Review.
• Sen N, Yilmaz O, Simsek I, Küpelioglu AA, Ellidokuz H. Detection of Helicobacter pylori DNA by a simple stool PCR method in adult dyspeptic patients. Helicobacter. 2005 Aug;10(4):353-9.
• Monteiro L, Gras N, Vidal R, Cabrita J, Mégraud F. Detection of Helicobacter pylori DNA in human feces by PCR: DNA stability and removal ofinhibitors. J Microbiol Methods. 2001 Jun;45(2):89-94.

Источник: https://helix.ru/kb/item/09-053